Оффлайн
- Регистрация
- 21.07.20
- Сообщения
- 40.408
- Реакции
- 1
- Репутация
- 0
Получив стабильно воспроизводящийся резервуар инфекции, Альтер и коллеги смогли не только лучше описать динамику развития болезни, но и исследовать характеристики зараженной крови. Хотя выделить вирус по-прежнему не удавалось, по изменениям различных параметров ученые смогли примерно описать его – например, они установили, что он окружен липидной мембраной, а диаметр вирусной частицы составляет от 30 до 60 нм.
Но для окончательной уверенности нужен был сам вирус. Выделяться NANBH упорно не желал, но биолог Майкл Хьютон, работавший на фармацевтическую компанию Chiron, придумал, как можно обхитрить его. Хьютон решил получить не вирусную частицу целиком, а только ее геном. Идея была проста: добыть как можно больше фрагментов ДНК зараженных клеток (гепатит С – РНК-содержащий вирус, но ученые работали со специально созданными ДНК-копиями его генома) и найти среди них те, которые не принадлежат обезьяне (Хьютон работал с животной моделью, созданной Альтером). Сегодня это можно сделать за несколько недель, но в начале 1980-х, когда Хьютон и его команда проводили свои эксперименты, ни геном обезьяны, ни геном человека расшифрованы не были, поэтому канадский специалист использовал очень изобретательную схему. Получив множество фрагментов ДНК и сложным способом «обогатив» свою коллекцию кусками, потенциально содержащими геном вируса, ученый «вклеил» каждый из них в геномы бактерий. Затем ученые нанесли на выросшие из этих бактерий колонии сыворотку крови людей с патологиями печени, вызванными NANBH. Они предположили, что, если в какую-то из бактерий все же попал вирусный геном, антитела, выработанные в организме зараженных загадочным вирусом пациентов, среагируют на них. Первые примерно 999 999 попыток успеха не принесли – но миллионная проверенная колония дала сигнал.
«Вытащив» заветную ДНК из бактерий, ученые исследовали ее – насколько позволяли тогдашние методы молекулярной биологии – и установили, к какой группе вирусов принадлежит NANBH (РНК вирусы из группы флавивирусов). Кроме того, они доказали, что синтезируемый с соответствующей этой ДНК вирусной РНК белок вызывает реакцию антител только при добавлении крови обезьян, зараженных NANBH, но не вирусами гепатита А или гепатита В. Таким образом Хьютон и коллеги окончательно доказали, что NANBH – совершенно отдельный вирус.
Но когда другие специалисты попытались вызвать у шимпанзе болезнь, вводя им в печень РНК нового вируса – у них ничего не получилось. Последнее решающее доказательство, что именно NANBH вызывает гепатиты, отсутствовало. Добыть его смог Чарльз Райс. Ученый исходил из знания о том, что вирусы при копировании собственных геномов часто допускают ошибки. Возможно, тот вирусный клон, который Хьютон обнаружил, перебрав миллион колоний, является «нерабочим» как раз из-за такой ошибки. Райс изучил последовательность РНК, предположил, где именно могут быть такие ошибки, и исправил их. Ученый безжалостно ввел «починенную» РНК в печень обезьянам – и они заболели.
Но для окончательной уверенности нужен был сам вирус. Выделяться NANBH упорно не желал, но биолог Майкл Хьютон, работавший на фармацевтическую компанию Chiron, придумал, как можно обхитрить его. Хьютон решил получить не вирусную частицу целиком, а только ее геном. Идея была проста: добыть как можно больше фрагментов ДНК зараженных клеток (гепатит С – РНК-содержащий вирус, но ученые работали со специально созданными ДНК-копиями его генома) и найти среди них те, которые не принадлежат обезьяне (Хьютон работал с животной моделью, созданной Альтером). Сегодня это можно сделать за несколько недель, но в начале 1980-х, когда Хьютон и его команда проводили свои эксперименты, ни геном обезьяны, ни геном человека расшифрованы не были, поэтому канадский специалист использовал очень изобретательную схему. Получив множество фрагментов ДНК и сложным способом «обогатив» свою коллекцию кусками, потенциально содержащими геном вируса, ученый «вклеил» каждый из них в геномы бактерий. Затем ученые нанесли на выросшие из этих бактерий колонии сыворотку крови людей с патологиями печени, вызванными NANBH. Они предположили, что, если в какую-то из бактерий все же попал вирусный геном, антитела, выработанные в организме зараженных загадочным вирусом пациентов, среагируют на них. Первые примерно 999 999 попыток успеха не принесли – но миллионная проверенная колония дала сигнал.
«Вытащив» заветную ДНК из бактерий, ученые исследовали ее – насколько позволяли тогдашние методы молекулярной биологии – и установили, к какой группе вирусов принадлежит NANBH (РНК вирусы из группы флавивирусов). Кроме того, они доказали, что синтезируемый с соответствующей этой ДНК вирусной РНК белок вызывает реакцию антител только при добавлении крови обезьян, зараженных NANBH, но не вирусами гепатита А или гепатита В. Таким образом Хьютон и коллеги окончательно доказали, что NANBH – совершенно отдельный вирус.
Но когда другие специалисты попытались вызвать у шимпанзе болезнь, вводя им в печень РНК нового вируса – у них ничего не получилось. Последнее решающее доказательство, что именно NANBH вызывает гепатиты, отсутствовало. Добыть его смог Чарльз Райс. Ученый исходил из знания о том, что вирусы при копировании собственных геномов часто допускают ошибки. Возможно, тот вирусный клон, который Хьютон обнаружил, перебрав миллион колоний, является «нерабочим» как раз из-за такой ошибки. Райс изучил последовательность РНК, предположил, где именно могут быть такие ошибки, и исправил их. Ученый безжалостно ввел «починенную» РНК в печень обезьянам – и они заболели.